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技術服務 >技術資料 >細胞增殖檢測
細胞增殖檢測

細胞增殖檢測

1.      細胞代謝活性檢測 

通過檢測活細胞相關的物質的含量(如蛋白質、酶)等間接測定待活細胞的數量來評價細胞的增殖能力。

特點:間接測定,反應細胞活性而非是否在增殖;

常用方法:MTT,CCK8,XTT等

應用:細胞活力、藥物作用的毒性,適合高通量分析實驗。


2.      細胞DNA合成檢測      

通過測定細胞的DNA合成含量來評價細胞

特點:直接測定DNA合成是檢測細胞增殖最準確方法

常用方法:BrdU和EdU;

應用:細胞DNA修復,分化及細胞標記物追蹤等。


3.      ATP濃度檢測  

利用熒光素酶Luciferase反應細胞ATP的含量,進而反應細胞活性。

特點:結果靈敏;

常用方法:熒光素酶催化反應;

應用:高通量細胞增殖檢測和篩選


4.      細胞增殖相關抗原檢測

通過檢測增殖細胞特異性地表達某些特定蛋白。

特點:反應體內腫瘤細胞的增殖能力,但是需組織切片不適合高通量;

常用方法:細胞增殖的標志物的免疫組化等;

應用:體內腫瘤組織。


5.      染料排斥法

活細胞有排斥木屑染料,如伊紅、臺盼藍、苯胺黑等的能力,而死細胞由于膜完整性的破壞,可被著色。適合少量細胞的統計,廣泛用于繪制細胞生長曲線等。


MTT

MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢(Zā)(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臢(Zā),用酶標儀在490nm波長處(英文說明書寫的是570nm)測定其光吸收值,在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值(OD值),來判斷活細胞數量,OD值越大,細胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。



CCK-8

CCK-8 kit是含有WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)化合物,用于細胞增殖檢測的一類檢測試劑盒。它的作用原理類似于MTT,在電子耦合試劑作用下被細胞線粒體中的一些脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲臜((Formazan)。細胞增殖越快,生成的Formazan越多,則顏色就越深。用酶標儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。CCK-8 Kit方法已被廣泛應用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選和細胞增殖試驗等。檢測原理是 WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)在電子耦合載體1-Methoxy PMS存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色甲臜產物(formazan),顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm波長處測定OD值,間接反映活細胞數量。

BrdU

Brdu,即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細胞培養加入,而后利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物,雙重染色,可判斷增殖細胞的種類,增殖速度,對研究細胞動力學有重要意義。

但由于抗體分子量大,難于摻入并被有效檢測,因此BrdU檢測需采用DNA酶或HCl或加熱使DNA變性;這些處理方法會破壞抗原識別位點,此外許多細胞周期分析的染料都需要dsDNA,這種處理方法也使得同一樣本無法同時進行細胞周期分析。對于植物細胞等有細胞壁的分析,采用抗體檢測還需要消化細胞壁,細胞壁消化酶常含有一些雜質,會導致檢測的可靠性降低,同時BrdU檢測則需要進行長時間的孵育--幾個小時甚至過夜。


EdU

EdU(5-Ethynyl-2’- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復制的DNA分子中,通過基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性,適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究,尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。

與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU染料只有BrdU抗體的1/500,在細胞內很容易擴散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更準確地反映DNA復制活性。


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