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技術服務 >蛋白表達與純化服務 >真核細胞蛋白的表達 >畢赤酵母蛋白表達及純化服務
畢赤酵母蛋白表達及純化服務

服務描述:

畢赤酵母作為表達宿主既具有原核生物繁殖快,易于培養,培養基廉價和實驗過程簡單可行等特點,又具有真核表達系統所具有的強有力的啟動子,還可以對外源蛋白進行加工折疊和翻譯后修飾,具備了典型的真核生物表達體系的特點。我們的酵母蛋白表達系統集高產量、高效率和類似哺乳動物表達系統的特點為一體,蛋白表達持久、穩定。


服務內容:

服務步驟

主要內容

交付內容

交付時間

目的基因全基因合成

1. GenBank中尋找目的蛋白的cDNA序列。

2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子及mRNA二級結構的優化。

3. 合成設計好的基因序列。

目的基因(連接在T載體或其它常規克隆載體上)及測序報告。

2

 

 

目的基因亞克隆

1. 培養并抽提含有目的基因的載體質粒。

2. 將目的基因亞克隆到合適的表達質粒上。

3. 測序驗證構建質粒的準確性。

4. 可提供表達載體(PET系列為主)。

正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。

2-3

 

畢赤酵母表達菌株電轉化

1. 酶切線性化表達質粒。

2. 將表達質粒通過電轉化到高效的畢赤酵母表達菌株中。

3. 通過PCR鑒定至少挑選5個陽性克隆。

4.可提供表達菌株:X33GS115KM71SMD1168

PCR陽性克隆及PCR結果報告

2

 

畢赤酵母表達菌株篩選

1. 5個陽性克隆于BMGY培養基中擴增,然后換至BMMY培養基中,并加入甲醇誘導表達目的蛋白。

2. SDS-PAGE電泳檢測培養上清中目的蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目的蛋白的表達

3. 如果培養上清中檢測不到表達,則通過將上清濃縮20倍作用再檢測,或通過Western-blot方法檢測目的蛋白表達(客戶需要提供相關抗體)。

陽性克隆菌株及表達篩選結果報告。

2

 

畢赤酵母表達菌株表達優化

1. 挑選20個陽性克隆進行常規表達篩選,并對其中表達最好菌株優化表達條件。

2. 對挑選出來的單克隆菌株,優化培養及誘導條件(培養基,菌體密度,甲醇濃度,誘導時間等),提高目的蛋白的表達量。

三個陽性克隆菌株及優化表達條件結果報告。

2

 

目的蛋白表達及純化

1. 搖瓶培養1L重組酵母菌,誘導表達目的蛋白。.

2. 通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

3. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

4. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

純化好的目的蛋白1~10mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度可達80%以上。

2-3

 

目的蛋白的再加工及詳細檢測

1. 內毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。

2. 通過HPLC,質譜等方法詳細檢測目的蛋白的質量。

加工后的終產品及相關實驗和檢測報告

2

 

大規模制備

按照小試工藝放大生產規模,制備客戶需要的合格蛋白產品。

合格的目的蛋白及服務報告

協商

 

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