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技術服務 >腺相關病毒 >非編碼RNA AAV包裝 >miRNA腺相關病毒
miRNA腺相關病毒

產品簡介:

miR-AAV過表達,根據客戶研究的miRNA,將pri-miRNA及其上下游200bp構建到腺相關病毒質粒,生產的病毒顆粒可以直接用于感染細胞或者動物實驗。

miR-AAV干擾,根據客戶研究的miRNA,設計構建干擾腺相關病毒質粒,生產的病毒顆粒可以直接用于感染細胞或者動物實驗。

服務流程:

過表達

 

干擾


產品優勢:

l  操作簡潔,無需轉染試劑

l  實驗周期短

l  對分裂期和非分裂期細胞均有感染作用

l  安全性可靠,低免疫原性

l  可在短時間內獲得穩定表達特定microRNA的細胞株 



附表1.各種RNAi制備方法的比較:

附表2.可供選擇的載體;

附表3.不同血清型AAV的組織嗜親性;

附表4.不同AAV血清型對相同的組織和細胞具有不同的感染效率;

附表5.各種病毒的特點;

附圖6. RNAi作用原理。


附表1.各種RNAi制備方法的比較:

比較項目

化學合成siRNA

載體shRNA

慢病毒shRNA

腺相關病毒shRNA

siRNA結構

雙鏈RNA或發夾結構RNA

發夾結構RNA

發夾結構RNA

發夾結構RNA

RNA干擾持續時間

<72小時

<10

>30

>60

適合的細胞系

轉染效率大于70%細胞

轉染效率大于20%,但是可以傳代細胞

幾乎所有細胞

多種血清型適應不同細胞

單次制備費用

重復使用費用

是否可自行擴增

不可以

可以

不可以

不可以

構建細胞穩轉株

不滿足

滿足,但有風險

滿足,可以同時制備多種穩定表達細胞系

滿足

組織特異性干擾實驗

不滿足

滿足

滿足

滿足

干細胞分化實驗

不滿足

不滿足

滿足

滿足

裸鼠荷瘤實驗

低重復性

低重復性

高重復性

高重復性

轉基因knockdown

不滿足

不滿足

滿足

滿足

 

附表2.可供選擇的載體:

編號

載體類型

載體用途

載體元件

PGMAAV-MA2

腺相關病毒

miRNA過表達

GPAAV-CMV-mCherry-MCS-WPRE

PGMAAV-MA1

腺相關病毒

miRNA過表達

GPAAV-CMV-eGFP-MCS-WPRE

PGMAAV-SB1

腺相關病毒

miRNA干擾

PGMAAV-CMV-intron-ZsGreen1-hU6-MCS

PGMAAV-4381

腺相關病毒

miRNA干擾

PGMAAV-CMV-intron-mCherry-hU6-MCS

 

附表3.不同血清型AAV的組織嗜親性:

吉滿生物在包裝腺相關病毒時有多種不同的AAV血清型可供客戶選擇,建議客戶針對不同組織器官選擇相應血清型的AAV病毒,見下表。

血清型

組織親和性

AAV1

肌肉,心臟,骨骼肌(包括心肌),神經組織

AAV2

中樞神經,肌肉,肝臟,腦組織,眼,

AAV3

肌肉,肝臟,肺,眼

AAV4

中樞神經,肌肉,眼,腦

AAV5

肺,眼,中樞神經,關節滑膜,胰腺 

AAV6

肺,心臟

AAV7

肌肉,肝臟

AAV8

肝臟,眼,中樞神經,肌肉

AAV9

心臟,肌肉,肺(肺泡),肝臟,中樞神經

DJ

視網膜,肝臟,肺,腎臟

DJ/8

大腦組織,其他離體組織

Rh10

肺,心臟,肌肉,中樞神經,肝臟

 

附表4.不同AAV血清型對相同的組織和細胞具有不同的感染效率:

Cell Line

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-8

AAV-9

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

13

100

2.5

0.0

0.1

10

0.7

0.0

500

0.2

HEK293

25

100

2.5

0.1

0.1

5

0.7

0.1

500

0.3

HeLa

3

100

2.0

0.1

6.7

1

0.2

0.1

667

0.2

HepG2

3

100

16.7

0.3

1.7

5

0.3

ND

1250

0.5

Hep1A

20

100

0.2

1.0

0.1

1

0.2

0.0

400

0.1

911

17

100

11

0.2

0.1

17

0.1

ND

500

0.0

CHO

100

100

14

1.4

333

50

10

1.0

25000

5.0

COS

33

100

33

3.3

5.0

14

2.0

0.5

500

0.3

MeWo

10

100

20

0.3

6.7

10

1.0

0.2

2857

1.0

NIH3T3

10

100

2.9

2.9

0.3

10

0.3

ND

500

0.1

A549

14

100

20

ND

0.5

10

0.5

0.1

1000

0.1

HT1180

20

100

10

0.1

0.3

33

0.5

0.1

333

0.2

Monocytes

1111

100

ND

ND

125

1429

ND

ND

100

ND

Immature DC

2500

100

ND

ND

222

2857

ND

ND

200

ND

Mature DC

2222

100

ND

ND

333

3333

ND

ND

100

ND

AAV-2 作為標準,感染效率為 100. ND =未檢測

[1]Grimm D, Lee J S, Wang L, et al. In vitro and in vivo gene therapy vector evolution via multispecies interbreeding and retargeting of adeno-associated viruses [J]. Journal of virology, 2008, 82(12): 5887-5911.

 

附表5.各種病毒的特點:

病毒表達系統

腺病毒表達系統

慢病毒表達系統

腺相關病毒系統

病毒基因組

雙鏈DNA病毒

RNA病毒

單鏈DNA病毒

是否整合

病毒基因組游離于宿主基因組外,瞬時表達外源基因

病毒基因組整合于宿主基因組,長時間、穩定表達外源基因

低頻整合

感染細胞類型

感染分裂和不分裂細胞

感染分裂和不分裂細胞

分裂和非分裂細胞

表達豐度

高水平表達

高水平表達

高水平表達

表達時間

快(1-2 天)

慢(2-4 天)

快(1-2 天)

滴度

滴度高達1E12pfu/ml

最高可達1E910TU/ml

最高可達1E913TU/ml

克隆容量

可插入高達8kb的外源片段,滴度隨插入片段長度增加而降低

可插入不超過8kb的外源片段,滴度隨插入片段長度增加而降低

可插入不超過3 kb外源DNA片段,滴度隨插入片段長度增加而降低

免疫原性

高免疫原性

低免疫原性

低免疫原性

動物模型

不能得到轉基因動物

可產生轉基因動物,效率達50以上

可產生轉基因動物

啟動子

可以更換特異性啟動子

可以更換特異性啟動子

可以更換特異性啟動子

能否用于MIRCORNA

可以

可以

可以

能否用于四環素誘導

不可以

TET-ONTET-OFF

TET-ONTET-OFF

 

附圖6.RNAi作用原理:

 

其它相關產品:

?  現貨光遺傳AAV腺相關病毒

?  現貨CRISPR/Cas9慢病毒(適用于難感染細胞)

?  CRISPR/Cas9基因敲除穩定株構建

?  慢病毒/腺病毒/腺相關病毒包裝服務

?  報告基因構建與檢測服務

 

 

 

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